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Real Taq DNA Polymerase

● 儲(chǔ)存條件:-20℃ 保存

● 濃    度: 5 U/ml

● 產(chǎn)品簡介

Real Taq DNA Polymerase是從克隆有Thermu aquaticus DNA Polymerase基因的大腸桿菌經(jīng)誘導(dǎo)表達(dá)后分離純化的，其分子量為94 KD。具有5’-3’DNA聚合酶活性和5’-3’外切核酸酶活性，無3’-5’外切酶活性。在PCR反應(yīng)中，Real Taq DNA Polymerase延伸速度為1-2 kb/分鐘，產(chǎn)物3’端帶A，可直接用TA載體克隆。

● 活性定義

1單位(U) Real Taq DNA Polymerase活力定義為在74℃、30分鐘內(nèi)，以活性化的大馬哈魚精子DNA作為模板/引物，將10 nmol脫氧核苷酸摻入到酸不溶物質(zhì)所需的酶量。

● 酶貯存緩沖液

20 mM Tris-HCl (pH 8.0);0.1 mMEDTA;1 mMDTT;100 mMKCl ; Stabilizers; 50% glycerol

● 10×Taq Buffer

200 mM Tris-HCl (pH 8.4);200 mMKCl;15 mMMgCl₂; 其它成分。

● 適用范圍

一般用于DNA片段的PCR擴(kuò)增、DNA標(biāo)記、引物延伸、序列測定、平末端加A等，產(chǎn)物可以直接用于T/A載體克隆。

● 反應(yīng)舉例：

注意：以下舉例為常規(guī)PCR反應(yīng)系統(tǒng)，僅供參考。實(shí)際反應(yīng)條件因模板、引物等的結(jié)構(gòu)不同而各異，需根據(jù)模板、目的片段的大小、堿基序列和引物長短等具體情況，設(shè)定最佳反應(yīng)條件。

以人基因組DNA為模板，擴(kuò)增1 kb的片段

1. 反應(yīng)體系的建立：50 ml反應(yīng)體系如下(可根據(jù)比例放大或縮小反應(yīng)體系)：

2.  PCR反應(yīng)循環(huán)的設(shè)置：

94℃ 3 min

94℃ 30 sec

55℃ 30 sec      30 cycles

72℃ 1 min

72℃ 5 min

3.  結(jié)果檢測：反應(yīng)結(jié)束后取5 ml反應(yīng)產(chǎn)物，瓊脂糖凝膠電泳檢測。